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水質(zhì)檢測(cè)儀

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地表水中快速檢測(cè)糞大腸菌群的方法

發(fā)布時(shí)間:2022/5/31 15:47:30 來(lái)源:貫奧儀器儀表 作者:便攜式多參數(shù)水質(zhì)分析儀器 閱讀次數(shù):

  想要知道地表水是否受到了糞水污染以及污染的程度如何,糞大腸菌群是一項(xiàng)非常重要的參數(shù)。因此如何能夠快速、可靠、準(zhǔn)確的檢測(cè)出糞大腸菌群含量對(duì)水質(zhì)健康具有重要意義。

  今天我們要講的是通過(guò)光度法快速檢測(cè)地表水中糞大腸菌群的操作方法,此方法原理是通過(guò)一定量的水樣與選擇性培養(yǎng)基混合均勻放置于44.5℃環(huán)境下,糞大腸菌群產(chǎn)生β-半乳糖苷酶,并分解色原底物釋放出色原體使培養(yǎng)基呈現(xiàn)顏色變化,通過(guò)連續(xù)分光光度(波長(zhǎng):300nm~600nm)測(cè)定,依據(jù)待測(cè)水樣色度變化與水中糞大腸菌群數(shù)成一定關(guān)系的原理,得出糞大腸菌群濃度。

采集地表水糞大腸菌群水樣

檢測(cè)時(shí)的干擾及消除

1.活性氯具有氧化性,能破壞微生物細(xì)胞內(nèi)的酶活性,導(dǎo)致細(xì)胞死亡,可在水樣采集時(shí)加入硫代硫酸鈉溶液消除干擾。

2.重金屬離子具有細(xì)胞毒性,能破壞微生物細(xì)胞內(nèi)的酶活性,導(dǎo)致細(xì)胞死亡,可在水樣采集時(shí)加入乙二胺四乙酸二鈉溶液消除干擾。

檢測(cè)所需試劑

1.糞大腸菌群檢測(cè)試劑主要成分:

——蛋白胨:5g;

——硫酸錳:0.005g;

——硫酸鎂:0.001g;

——硫酸鋅:0.001g;

——磷酸鹽:1.78g;

——兩性霉素B:0.60g;

——蒸餾水1000mL。

制法:上述試劑溶于蒸餾水中,充分混勻,調(diào)整pH值為7.2~7.4,68.95kPa(115℃),高壓滅菌20min,分裝貯存于4℃避光備用。也可采用市售商品化培養(yǎng)基制品。

2.硫代硫酸鈉。

3.乙二胺四乙酸二鈉。

4.硫代硫酸鈉溶液:0.10g/mL,

  稱取15.7g硫代硫酸鈉,溶于適量水中,定容至100mL,臨用現(xiàn)配。

5.乙二胺四乙酸二鈉溶液:0.15g/mL,稱取15g乙二胺四乙酸二鈉,溶于適量水中,定容至100mL,此溶液保質(zhì)期為30d。

6.無(wú)菌水:取適量純水,經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌20min,備用。

檢測(cè)所需儀器

1.采樣瓶:具螺旋帽或磨口塞的100mL、250mL、500mL廣口玻璃瓶。

2.微生物快速檢測(cè)儀:

——恒溫培養(yǎng)單元:不少于2個(gè)溫控系統(tǒng),溫度控制精度1℃,可自動(dòng)調(diào)節(jié)待檢測(cè)樣本培養(yǎng)溫度(44.5℃±1℃);

——檢測(cè)單元:不少于4個(gè)獨(dú)立的檢測(cè)系統(tǒng),可實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣本的同時(shí)監(jiān)測(cè);

——數(shù)據(jù)顯示、處理單元:自動(dòng)輸出檢測(cè)結(jié)果,可查詢和顯示歷史數(shù)據(jù)。

3.高壓蒸汽滅菌器:121℃可調(diào)、101.3kpa。

4.量筒:50mL、100mL。

5.移液管:1mL、10mL。

6.天平:感量0.01g。

水樣采集與保存

采集方法

  點(diǎn)位布設(shè)及采樣頻次按照相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。與其它項(xiàng)目一同采樣時(shí),先單獨(dú)采集微生物樣品,采樣瓶不得用水樣洗滌,采集水樣于滅菌的采樣瓶中。

  采集河流、湖庫(kù)等地表水樣時(shí),可握住瓶子下部直接將帶塞采樣瓶插入水中,約距水面10cm-15cm處,瓶口朝水流方向,拔玻璃塞,使水樣灌入瓶?jī)?nèi)然后蓋上瓶塞,將 采樣瓶從水中取出。如果沒(méi)有水流,可握住瓶子水平往前推。采樣量一般為采樣瓶容量的80%左右。采好水樣后,迅速扎上無(wú)菌包裝紙。

  采集地表水、廢水樣品及一定深度的水樣時(shí),可使用滅菌過(guò)后專用采樣裝置采樣。在同一采樣點(diǎn)進(jìn)行分層采樣時(shí),應(yīng)自上而下進(jìn)行,避免不同層次的攪擾。

  如果采集的是含有活性氯的樣品時(shí),需在采樣瓶滅菌前加入硫代硫酸鈉溶液,以除去活性氯對(duì)細(xì)菌的抑制作用(每125mL容積加入0.1mL的硫代硫酸鈉溶液);如果采集的是重金屬離子含量較高的樣品,則在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉溶液,以消除干擾(每125mL容積加入0.3mL的乙二胺四乙酸二鈉溶液)。

保存方法

  采樣后應(yīng)在2h內(nèi)檢測(cè),否則,應(yīng)10℃以下冷藏但不得超過(guò)6h。實(shí)驗(yàn)室接樣后,不能立即開(kāi)展檢測(cè)的,將水樣于4℃以下冷藏并在2h內(nèi)檢測(cè)。

檢測(cè)步驟

接種

  接種待測(cè)水樣于裝有5mL培養(yǎng)基的檢測(cè)瓶中,定容至20mL,水樣與培養(yǎng)基應(yīng)充分混勻。

培養(yǎng)

  打開(kāi)儀器電源開(kāi)關(guān),待儀器穩(wěn)定30 min后,將接種后的檢測(cè)瓶放置于微生物快速檢測(cè)儀中,按照儀器說(shuō)明書進(jìn)行操作,設(shè)置檢測(cè)溫度為44.5 ℃,點(diǎn)擊“檢測(cè)”按鈕,2-18小時(shí),儀器自動(dòng)培養(yǎng)得出結(jié)果。

空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)

  采用無(wú)菌水作為待測(cè)水樣按照接種和培養(yǎng)的操作步驟進(jìn)行空白測(cè)定,測(cè)試結(jié)果不得檢出,否則該次樣品測(cè)定結(jié)果無(wú)效,應(yīng)重新測(cè)定空白以及待測(cè)樣品。

陰性及陽(yáng)性對(duì)照

  將標(biāo)準(zhǔn)菌株制成300-3000個(gè)/mL的菌懸液,將菌懸液按接種和培養(yǎng)要求操作,陽(yáng)性菌株應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng);陰性菌株呈現(xiàn)陰性反應(yīng),否則,該次樣品測(cè)定結(jié)果無(wú)效,應(yīng)重新測(cè)定。

  糞大腸菌群的陰性、陽(yáng)性菌株可以參考相關(guān)的參照表

 糞大腸菌群陰性陽(yáng)性對(duì)照表

以上內(nèi)容來(lái)源于《DB37/T 3787—2019 水質(zhì) 糞大腸菌群測(cè)定 光度法》